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实验材料：
基础培养基
血清（常规为fbs/nbs）
无菌pbs磷酸盐缓冲液
电动移液枪
移液枪
超净工作台
无菌二甲基亚砜（dmso）
针式滤器 (0.22μm pes膜) [nest]
杯式滤器(0.22μm pes膜) [nest]
15ml、50ml无菌离心管[nest]
程序降温盒[nest]
pet/petg方形试剂瓶[nest]
移液管[nest]
自动旋盖机[nest]
盒装无菌吸头[nest]
实验准备：
冻存液准备：
一般的细胞：55%基础培养基 40%牛血清（fbs/nbs） 5%dmso
重要的细胞：90%牛血清（fbs/nbs） 10%dmso
冻存液配置完成后，15ml离心管分装，4℃条件下储存备用。若配置量较大，可分装入50ml离心管，-20℃条件下冷冻储存。（若牛血清内存在析出沉淀物，采用0.22μm 滤膜过滤除菌）
使用前37℃水浴加热
待冻存细胞：
使细胞冻存前，选择细胞生长状态良好，且处于对数生长期的细胞，冻存前12~24h换新鲜培养基维持细胞状态。
实验流程：
观察待冻存细胞密度，约为80%~90%。用移液枪吸出陈旧培养基，加入无菌pbs清洗细胞1-2次，去除培养环境中的残留培养基。
加入适量对应胰酶或消化液，使胰酶没过细胞，放入培养箱消化。显微镜下观察细胞状态，胞质回缩，细胞间不再连接成片，此时加入完终止液终止消化。
用吸头轻轻吹打细胞，形成细胞悬液，将细胞悬液1000rpm，离心3-5min。丢弃上清，加入适量预先配制好的冻存液，轻轻吹打使细胞均匀并计数。用冻存液调节的细胞密度，使之终密度为5×106/ml～1×107/ml。
用移液枪按照预计容量，分装入细胞冻存管[nest]中，采用自动旋盖机[nest]旋盖密封。
标准的冻存程序为降温速率况处-1℃～-2℃/ min，可将待冻存细胞按照以下步骤逐步冻存：室温→4℃（20min）→-20℃（30min）→-80℃（过夜）→液氮长期保存。
也可将待冻存放入程序降温盒[nest]，直接-80℃过夜，再转移至液氮保存。
使用到的nest产品：
无菌二甲基亚砜（dmso）
针式滤器 (0.22μm pes膜) [nest]
杯式滤器(0.22μm pes膜) [nest]
15ml、50ml无菌离心管[nest]
程序降温盒[nest]
pet/petg方形试剂瓶[nest]
移液管[nest]
自动旋盖机[nest]
盒装无菌吸头[nest]
