账号
核酸提取是指将核酸（dna和rna）从细胞中提取出来的过程，总的来说包括细胞裂解、核酸纯化及后续核酸浓度、纯度测定的步骤。根据原始样品的种类和核酸产物后续的各种应用目的，细胞裂解和核酸纯化步骤有不同的处理方法和要求。
一、实验室中的dna提取：
案例一：小鼠基因型判定实验的模板dna提取
初始样品为小鼠尾切段。基因型判定实验对dna模板的浓度、纯度要求不高，消化提取过程相对简单。
实验步骤：
1.将1cm尾巴切段置于1.5ml微量离心管中，加入适量裂解液（lysis buffer）和蛋白酶（proteinase k）于55~65℃水浴过夜消化。
2.充分消化后的尾巴样品加入沉淀液（precipitation buffer）后用旋涡混匀器来使杂质蛋白充分沉淀，杂质沉淀后通过离心操作（如4℃，4000xg，5min），取出溶有目标dna的上清液，丢弃杂质沉淀。
3.上清液中加入100%异丙醇，小心颠倒离心管30~40次，便可以将产物dna沉降。离心操作（4℃，10000xg或12000rpm，10min）去除上清。
4.用75%乙醇洗涤两次dna产物，待乙醇充分挥发后，用水或te缓冲液（tris-edta buffer）收获dna模板产物。
进行后续的pcr扩增实验前，可以使用nanodrop仪器来进行dna浓度和纯度的测定来提高pcr反应的成功率。在pcr扩增实验不顺利的情况下，也可以进一步对dna产品的完整度进行检测，具体方法可以参考核酸检测和核酸扩增的有关内容。
案例二：用于重组的质粒dna提取
用于重组的质粒对dna产物的浓度、纯度和完整度都要求较高，否则无法成功完成质粒酶切和酶连的步骤。
实验步骤：
1.从含有过夜培养大肠杆菌的试管中取出适量菌液置于微量离心管中，低速离心（4000xg， 5min）处理后收获大肠杆菌，除去培养液。
2.使用质粒提取试剂盒(plasmid dna extraction kit)提取大肠杆菌质粒。原理菌体裂解后，加入中和液（neutralization buffer）过微型柱，使dna特异结合于柱上，而其他杂质会过柱洗脱。最后用洗脱液(elute buffer)洗下dna即可得到质粒dna产物。
3.经试剂盒提取后的质粒dna有时需要经电泳切胶回收的操作将目标质粒dna与其他dna分离。切下的胶消化后经dna纯化试剂盒纯化即可得到纯度较高的目标质粒dna。具体的内容可以参考核酸检测的有关内容。
二、实验室中的rna提取
[ rna extraction: principle, procedure, protocol and importance – genetic education]：
rna提取过程与dna类似，也是通过裂解细胞后通过有机溶剂（苯酚、氯仿、异戊醇）沉降杂质的方法来分离rna。但rna的稳定性比dna低很多，因此对rna提取对温度和污染清除的要求更高。实研操作一般从以下几个角度来提升成功率：降低rna水解酶活性、提升rna稳定性、使rna与dna和蛋白分离、仅沉降rna、有效去除dna。
案例一：总rna提取
实验步骤与dna提取类似，但有机溶剂的使用会有所不同。在首次离心后，混合物会分为三层，rna溶于上层无色水相，而dna和蛋白会处于中间层，组织残渣等杂质处于底层酚-氯仿相中2。
实验步骤：
1.向提取样品中加入裂解液（如trizol），裂解细胞与组织，室温静置5-8分钟。
2.加入氯仿，充分混匀后离心（4℃，12000rpm，10min），取出上清液。
3.向上清液中加入异丙醇沉降rna，并离心（4℃，12000rpm，10min）弃去上清。
4.用75%乙醇洗涤产物两次，待乙醇挥发后加入rnase-free水溶解产物。
实验中用到的耐思耗材和仪器：
枪头、微量离心管、（15、50ml）离心管、迷你旋涡分离器（105003）。
